基于酵母雙雜交技術(shù)的PRR11相互作用蛋白篩選與初步分析
作者：余淋麗; 張蓮; 張春冬; 卜友泉 重慶醫(yī)科大學生物化學與分子生物學教研室重慶醫(yī)科大學分子醫(yī)學與腫瘤研究中心; 重慶400016
摘要：目的:采用酵母雙雜交技術(shù),篩選PRR11的相互作用蛋白,為深入研究其分子行為機制奠定基礎。方法:構(gòu)建用于酵母雙雜交篩選的PRR11誘餌質(zhì)粒并檢測其自激活作用,根據(jù)結(jié)果進一步構(gòu)建突變體獲得具有較低自激活作用的突變體。對人胎腦cDNA文庫進行篩選,獲得初始陽性克隆。通過LacZ報告基因檢測、回轉(zhuǎn)驗證、陽性克隆測序及BLAST序列比對分析,排除假陽性克隆和重復克隆,確定PRR11的候選相互作用蛋白。結(jié)果:PRR11具有自激活作用,構(gòu)建了一個較低自激活作用的PRR11突變體。通過酵母雙雜交篩選,獲得102個初始陽性克隆轉(zhuǎn)化子。經(jīng)LacZ報告基因檢測,將陽性克隆鎖定至39個。通過測序和序列比對分析,證實這39個克隆屬于編碼15種不同蛋白的基因。最終有RNF41等4個蛋白通過回轉(zhuǎn)驗證。結(jié)論:RNF41、SCG5、BCYRN1和PRR13是PRR11的潛在相互作用蛋白。
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重慶醫(yī)科大學學報雜志
重慶醫(yī)科大學學報雜志， 月刊，本刊重視學術(shù)導向，堅持科學性、學術(shù)性、先進性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：指南與共識、卵巢癌診治、宮頸癌診治、子宮內(nèi)膜癌診治、少見婦科惡性腫瘤診治等。于1976年經(jīng)新聞總署批準的正規(guī)刊物。
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