沉默HIF-1α基因?qū)87細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響
摘要：目的觀察沉默低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）基因后對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響。方法實(shí)驗(yàn)分3組，干擾組（轉(zhuǎn)染表達(dá)HIF-1α-shRNA的質(zhì)粒）、對(duì)照干擾組件（轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照shRNA序列）及未處理組。干擾組利用前期構(gòu)建的HIF—1α基因的短發(fā)夾RNA（shRNA）沉默HIF-1α基因，構(gòu)建HIF-1α-shRNA慢病毒表達(dá)載體，存脂質(zhì)體介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U87。采用RT-PCR和Westernblotting檢測(cè)HIF-1α基因干擾效率．MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖能力，遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的體外遷移能力，Transwell小室模型檢測(cè)細(xì)胞的體外侵襲及轉(zhuǎn)移能力。結(jié)果RT—PCR和Westernblotting實(shí)驗(yàn)證實(shí)，與對(duì)照干擾組及未處理組比較，十?dāng)_組細(xì)胞月HIF-1α mRNA表達(dá)水平明顯下降，蛋白條帶明顯減弱。MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示，干擾組細(xì)胞增殖水平較其他2組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0．05）。Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)中，未處理組、對(duì)照干擾組、干擾組穿膜細(xì)胞數(shù)分別為（125．2±10．8）個(gè)、（118．3±8．3）個(gè)、（60．9±5．4）個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P〈0．05）。結(jié)論HIF-1α—shRNA能有效抑制U87細(xì)胞株HIF-1α mRNA及蛋白的表達(dá)．并能抑制U87細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移能力。
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