基于CRISPR/Cas9技術(shù)研究金針菇冷誘導(dǎo)結(jié)實基因HK1和HK2的編輯轉(zhuǎn)化系統(tǒng)
作者：歐陽萍蘭; 李瓊潔; 郭麗瓊; 林俊芳; 葉志偉; 魏韜; 鄭倩望; 伍土恒; 羅潤 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院&食品生物技術(shù)研究所; 廣東廣州510640; 廣東省微生態(tài)制劑工程技術(shù)研究中心; 廣東廣州510640
摘要：對金針菇(Flammulina velutipes)冷誘導(dǎo)相關(guān)的組氨酸激酶基因HK1和HK 2構(gòu)建了基因組編輯(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表達(dá)載體,探索了金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對潮霉素的最低敏感濃度,利用PEG介導(dǎo)的方法將表達(dá)載體pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA轉(zhuǎn)化金針菇原生質(zhì)體,經(jīng)潮霉素篩選后的擬轉(zhuǎn)化子再進(jìn)行PCR鑒定。結(jié)果顯示:金針菇菌絲體及原生質(zhì)體對潮霉素的最低敏感濃度均為50μg/mL;經(jīng)潮霉素篩選后的部分?jǐn)M轉(zhuǎn)化子成功擴(kuò)增出Cas9的部分片段,攜帶有HK1、HK2基因載體的Cas9蛋白基因成功整合到了金針菇的基因組中,兩個表達(dá)載體轉(zhuǎn)化率分別為24.1%和12.5%。
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食用菌學(xué)報雜志
食用菌學(xué)報雜志， 雙月刊，本刊重視學(xué)術(shù)導(dǎo)向，堅持科學(xué)性、學(xué)術(shù)性、先進(jìn)性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：遺傳育種、生理生化、馴化栽培、栽培材料、病蟲害防治、產(chǎn)后加工等。于1994年經(jīng)新聞總署批準(zhǔn)的正規(guī)刊物。
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