白蠟蟲far3基因cDNA全長克隆、原核表達(dá)和酶活分析
摘要：脂酰輔酶A還原酶(FAR)可將脂酰輔酶A還原為相應(yīng)的脂肪醇,在白蠟生物合成中起至關(guān)重要的作用。本研究通過cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)獲得白蠟蟲Ericerus pela far3基因cDNA全長,其開放閱讀框(ORF)1 566 bp。對白蠟蟲FAR3編碼蛋白進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析,發(fā)現(xiàn)FAR3與人類Homo sapiens、小鼠Mus musculus、黑腹果蠅Drosophila melanogaster等物種的FAR聚為一支;成功構(gòu)建pET-30a eGFP/EpelFAR3原核表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸桿菌Escherichia coli BL21感受態(tài)細(xì)胞,在濃度為0.05 mmol·L^-1的異丙基硫代半乳糖苷誘導(dǎo)6 h后有較高的蛋白表達(dá)量;經(jīng)Western blot驗證,表達(dá)蛋白分子量與預(yù)估蛋白分子量符合;質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)分值為3 900,肽段覆蓋度74%,所得肽段與理論序列相符;利用底物C24脂酰輔酶A、C26脂酰輔酶A、C28脂酰輔酶A和C30脂酰輔酶A對原核表達(dá)蛋白進(jìn)行活性分析,利用氣相色譜進(jìn)行蛋白活性驗證,沒有理論產(chǎn)物相應(yīng)脂肪醇的生成。本研究中白蠟蟲far3 cDNA ORF的獲得及原核表達(dá)的實現(xiàn),為進(jìn)一步的功能和組織表達(dá)定位研究奠定了基礎(chǔ)。
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四川動物雜志
四川動物雜志， 雙月刊，本刊重視學(xué)術(shù)導(dǎo)向，堅持科學(xué)性、學(xué)術(shù)性、先進(jìn)性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：研究報告、基礎(chǔ)資料 、野生動物保護(hù)與自然保護(hù)區(qū) 、實驗動物與動物實驗、教學(xué)探索 、經(jīng)濟(jì)動物與動物養(yǎng)殖、綜述與講座。等。于1981年經(jīng)新聞總署批準(zhǔn)的正規(guī)刊物。
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