腺病毒介導的人端粒酶反轉錄酶牙周膜細胞系的建立
作者：孫貴軍; 秦曉東; 王世琴; 胡慧珍; 陸笑顏; 金佳佳; 吳生榮; 何祥一 蘭州大學口腔醫學研究所; 中國農業科學院蘭州獸醫研究所; 蘭州730000
摘要：目的通過腺病毒法建立穩定表達外源性人端粒酶反轉錄酶(hTERT)基因的牙周膜細胞系,以構建腺病毒介導的高效、穩定的hTERT牙周膜細胞系。方法聚合酶鏈反應(PCR)法擴增hTERT基因編碼序列,構建同源重組腺病毒質粒pAd-pshuttle-cmv-hTERT,收集腺病毒顆粒后感染人牙周膜細胞,實時熒光定量PCR檢測hTERT及成骨相關基因堿性磷酸酶、核心結合因子2、骨涎蛋白、骨鈣素、骨橋素、Ⅰ型膠原蛋白mRNA的表達水平,茜素紅染色觀察成骨分化能力,CCK-8檢測細胞增殖能力。結果成功構建了含hTERT基因的腺病毒顆粒并感染牙周膜細胞,感染細胞與正常牙周膜細胞形態相似;實時熒光定量PCR結果顯示hTERT及成骨相關基因在感染細胞中高表達;茜素紅染色顯示牙周膜細胞系成骨能力強;CCK-8結果示牙周膜細胞系增殖能力強。結論通過腺病毒法成功建立了過表達hTERT的人牙周膜細胞系,其具有較強的成骨分化能力,這為研究牙周膜再生機制提供了一個理想的細胞系。
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