人膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子基因片段克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)
摘要：目的在大腸桿菌中表達(dá)具有生物活性的人膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell linederived neurotrophic factor, GDNF）蛋白。方法從人膠質(zhì)瘤組織中提取總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription PCR，RT—PCR）方法擴(kuò)增出GDNFDN段，并將經(jīng)雙酶切后的GDNF基因片段直接與表達(dá)載體pET28a＋連接，構(gòu)建重組表達(dá)載體pET28a＋GDNF，再將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中進(jìn)行異丙基-β—D一硫代半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)；采用分子篩層析法對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化；用十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）對其純度進(jìn)行鑒定。結(jié)果酶切和測序證實，PCR擴(kuò)增出GDNF基因片段為GDNF成熟肽編碼序列；表達(dá)產(chǎn)物的SDS—PAGE顯示，相對分子質(zhì)量16000處有一新增蛋白帶。結(jié)論本研究所構(gòu)建的原核表達(dá)系統(tǒng)可表達(dá)人GDNF。
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國際生物制品學(xué)雜志
國際生物制品學(xué)雜志， 雙月刊，本刊重視學(xué)術(shù)導(dǎo)向，堅持科學(xué)性、學(xué)術(shù)性、先進(jìn)性、創(chuàng)新性，刊載內(nèi)容涉及的欄目：病毒專題、疫苗研究、治療制品、生物信息、綜述等。于1978年經(jīng)新聞總署批準(zhǔn)的正規(guī)刊物。
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