百合谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因(LotGSTL)的克隆及原核表達(dá)
摘要：采用RACE技術(shù),克隆OT百合‘Robina’(Lilium OT hybrids’Robina’)中編碼谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因LotGSTL,對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,研究了該基因在不同組織中的表達(dá)特性,并對(duì)該基因進(jìn)行原核表達(dá)。結(jié)果顯示:該基因全長(zhǎng)800 bp,ORF為717 bp,編碼238個(gè)氨基酸。氨基酸序列比對(duì)及系統(tǒng)分析表明,該基因與擬南芥的兩個(gè)Lambda類GST基因聚為一類,初步確定為百合Lambda類GST基因,命名為L(zhǎng)otGSTL。生物信息學(xué)分析表明,LotGSTL蛋白含有典型的GST蛋白保守結(jié)構(gòu)域,為親水性蛋白,無(wú)跨膜結(jié)構(gòu),分子量為27 278.2 Da,理論等電點(diǎn)為5.2,分子式為C1257H1933N309O361S4,可能存在14個(gè)磷酸化位點(diǎn)。建立了穩(wěn)定的LotGSTL1原核表達(dá)體系,原核表達(dá)的LotGSTL1蛋白大約為27 kD,與預(yù)測(cè)的蛋白相對(duì)分子量一致。分析了LotGSTL基因在不同器官中的表達(dá)模式,發(fā)現(xiàn)其在花、葉、根、鱗莖中表達(dá)量均較高,而莖中表達(dá)量較低,相對(duì)表達(dá)量依次為:花>葉>根>鱗莖>莖。該研究將為解析百合LotGSTL基因的抗逆功能提供幫助,對(duì)于未來(lái)百合抗逆分子育種的研究有所幫助。
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