適于基因組測序的高質量桃線粒體DNA的高效提取方法
作者：張穎; 武軍凱; 王海靜; 劉璐琪; 殷亞蕊; 張立彬 河北科技師范學院園藝科技學院; 河北秦皇島066000
摘要：高質量線粒體DNA(mtDNA)是線粒體基因組測序及序列分析的重要前提。為獲得高質量桃mtDNA,以‘21世紀’桃葉片為外植體,24℃完全避光條件下進行愈傷組織誘導及增殖。對獲得的愈傷組織進行勻漿化處理,結合差速離心、蔗糖襯墊和SDS裂解等方法提取并純化線粒體。結果表明:MS培養基添加3.0 mg·L-1 6-BA和1.0 mg·L-1 2,4-D可高效誘導并增殖桃葉片愈傷組織,誘導率可達到100%。熒光顯微鏡檢測顯示純化后的線粒體完整且具有活性。提取mtDNA的產率為13.10μg·g-1,無RNA和蛋白質等其它雜質污染。mtDNA電泳檢測條帶大小約為23 kb,無降解。特異性基因PCR檢測表明獲得的mtDNA不存在核DNA和葉綠體DNA污染,其純度可滿足后續分子生物學試驗及高通量基因組測序的要求。該研究建立了一個適合桃mtDNA快速高效提取方法,為后續相關分子生物學研究提供了參考依據。
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北方園藝雜志
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